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多肽溶解中的主要問題是二級結構的形成
點擊次數:396 發布時間:2022-05-10
  今天為大家分享一下關于多肽溶解的方法,下面讓我們一起來了解一下吧。
 
  1. 多肽溶解中的主要問題是二級結構的形成。
 
  雖然疏水肽鏈二級結構的形成更明顯,但除了最短的肽鏈外,該現象發生在幾乎所有肽鏈,與極性無關。因此,溶解多肽的第一個原則是用無菌的蒸餾水或去離子水(如果條件允許則用無氧水)。
 
  多肽溶液可能遇到細菌降解。為避免該現象的發生, 多肽應溶解在無菌的蒸餾水中, 或者用0.45或0.2μm孔徑的濾膜過濾除菌。包含Cys、Met、Trp的多肽特別容易氧化, 因此應該溶于無氧的水中。無氧水可以通過注入惰性氣體(氮、氦、氬)減壓除氣得到。
 
  2. 若多肽不溶于純水,超聲處理有助于打碎顆粒并增加溶解度。注意: 超聲處理會引起溶液發熱和多肽降解。
 
  3.若多肽中包含多個堿性氨基酸,使用(1-10%)的乙酸水溶液;對于疏水性非常強的多肽,則使用50%乙酸。
 
  4.若多肽中含有大量酸性氨基酸,可用氨溶液(1-10%)或乙酸乙基或重碳酸鹽等揮發性的堿性緩沖液溶解。pH值在層析前必須調整。
 
  5.異丙醇和乙腈能溶解中等大小的肽。若肽要上柱,有機溶劑的量則必須很少,否則將嚴重影響停留時間。
 
  6.若多肽因為含有Val、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芳烴側鏈而高度疏水,或為中性肽時, DMF或DMSO等膜變性劑的使用,有助于多肽的溶解。
 
  a. 高濃度膜變性劑通過破壞多肽的二級結構而助溶。
 
  b.膜變性劑適于多肽分析液的制備, 但可能會對其生物活性的研究工作造成干擾。
 
  c. DMF是最佳變性劑(最高濃度可達30%), 滴加至多肽溶解。
 
  d. 反相層析時, DMF將與洗脫液前峰一起流出, 依注入量的多少, 峰值可能很高。大多數肽能在大量DMF 流出后幾分鐘內流出, 若肽鏈很小, 洗脫太早, 多肽的量將降低。

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